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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

球黑孢菌拉丁屬名: Khuskia oryzae H.J. Huds.

異常畢赤酵母拉丁屬名: Pichia anomala

蠟樣芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus  cereus

釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae Hansen

水稻紋枯病（立枯絲核菌）拉丁屬名: Thanatephorus cucumeris

黑曲霉拉丁屬名: Aspergillus  niger

阪崎氏年輕泰坦桿菌(阪崎克羅諾桿菌) 拉丁屬名: Cronobacter  sakazakii

亮白曲霉拉丁屬名: Aspergillus  candidus

戊糖乳桿菌拉丁屬名: Lactobacillus pentosus

嗜熱脂肪地球芽胞桿菌拉丁屬名: Geobacillus   stearothermophilus

克魯斯假絲酵母拉丁屬名: Candida  krusei

葡枝根霉拉丁屬名: Rhizopus  stolonifer

臘狀芽胞桿菌用途: 產(chǎn)蛋白酶

大腸埃希菌拉丁屬名: coli

土味鏈霉菌拉丁屬名: Streptomyces odorifer
小鼠源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒說明書IL-2 ELISA KIT 小鼠白介素2 96T

TSHB 英文名稱： 小鼠抗促甲狀腺素 0.1ml

C6orf57 英文名稱： 6號染色體開放閱讀框57 0.2ml

Anti-Phospho-Met (Tyr1349) 磷酸化肝細胞生長因子受體(原癌基因)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

小鼠8異素(8-iso-PG)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA Kit進口/分裝

小鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ) ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Collagen Type Ⅰ,Col ⅠELISA Kit進口/分裝

小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse C-telopeptide of type Ⅰ collagen,CTX-Ⅰ ELISA Kit特價供應(yīng)

CDC16 英文名稱： 細胞分裂周期蛋白16 0.2ml

Anti-Phospho-cdc2 (Thr14) 磷酸化周期素依賴激酶2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

TPO(Thyroid Peroxidase) 甲狀腺過氧化物酶(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-Phospho-cdc25C (Ser216) 磷酸化細胞分裂周期蛋白25CMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh ORP8 氧化固醇結(jié)合蛋白8 規(guī)格 0.2ml

IGFBP7 Kit Human 人 IGFBP7 ELISA配對 ELISA

phospho-TRIM25(Ser100) 英文名稱： 磷酸化雌激素反應(yīng)指狀蛋白 0.1ml

PLAU/uPA (Plasminogen activator,urokinase) 尿激酶型纖溶酶原激活因子(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-AVPR2 精氨酸加壓素受體2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-AKT2 (Ser474) 磷酸化蛋白激酶B2 規(guī)格 0.1ml

Myeloperoxidase 濃縮液 0.1ml 進口分裝

UGDH 英文名稱： 尿苷二磷酸葡萄糖脫氫酶 0.2ml

DNAJC3 英文名稱： 干擾素誘導(dǎo)蛋白p58ipk 0.1ml

Anti-AVPR2 精氨酸加壓素受體2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

CYBR1 英文名稱： 細胞色素B還原酶1 0.2ml

Anti-Beta-lactoglobulin β-乳球蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 1ml

Human desmin,Des ELISA Kit 人結(jié)蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-SSB/La 干燥癥SSB/LaMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Goat Anti-human IgM/Bio 生物素標記的羊抗人IgM 規(guī)格 0.1ml

Lp-PL-A2(Mouse lipoprotein-associated phospholipase A2) ELISA Kit 小鼠脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2 96T

Proprotein Convertase 2 英文名稱： 神經(jīng)轉(zhuǎn)化酶2 0.1ml