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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

肺形側(cè)耳注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

泡盛曲霉拉丁屬名: Aspergillus awamori

大腸埃希氏菌拉丁屬名: Escherichia  coli

糞纖維單胞菌拉丁屬名: Cellulomonas  fimi

枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus  subtilis

短乳桿菌拉丁屬名: Lactobacillus  brevis

紅球菌拉丁屬名: Rhodococcus  qingshengii

生癌腸桿菌拉丁屬名: Enterobacter cancerogenus

炭角菌*拉丁屬名: Xylaria sp.

乳明串珠菌拉丁屬名: Leuconostoc lactis

偏腫栓孔菌拉丁屬名: Trametes gibbosa

細鏈格孢注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

米根霉拉丁屬名: Rhizopus oryzae

毒害艾美耳球蟲拉丁屬名: necatrix

粉紅聚端孢注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
小麥源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 EPOR Kit Human 人 EPOR ELISA配對 ELISA

TTC21B 英文名稱： 四聚體多肽蛋白21B 0.2ml

CD24 英文名稱： CD24 0.1ml

Anti-CD25/IL-2RA 白介素2受體a鏈Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

兔淋巴細胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISA Kit 進口/原裝

兔內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒 英文名稱：Rabbit Endothelial nitric oxide synthase,eNOS ELISA Kit 進口/原裝

兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit urokinase plasminogen activator,uPA ELISA Kit 特價供應(yīng)

Cdc14A 英文名稱： 細胞周期調(diào)控因子14A 0.1ml

Anti-PAR4 蛋白酶活化受體4Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

RANA(Human rheumatoid arthritis associated nuclear artigen) ELISA Kit 人抗核抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-P21/CDKN1A p21蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Hyaluronidase2 透明質(zhì)酸酶2/玻璃酸酶2 規(guī)格 0.2ml

NSE ELISA Kit 大鼠神經(jīng)特異性烯醇化酶 96T

PI3 Kinase p110 beta 英文名稱： 磷脂酰肌醇激酶(PI3Kβ) 0.1ml

人肽-主要組織相容性復合體復合物(pMHC)ELISA試劑盒英文名稱：Human peptide major histocompatibility complex,pMHC ELISA Kit進口/分裝

Peptide YY 酪酪肽多肽(1-36)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-Bassoon 鋅指蛋白231Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-5-Lipoxygenase(Ser271) 磷酸化5-脂氧合酶 規(guī)格 0.1ml

Keratin17 濃縮液 0.1ml 進口分裝

UBE2V1 英文名稱： 泛素結(jié)合酶E2變異體1 0.2ml

CHSS2 英文名稱： 軟骨素酶2 0.1ml

CXXC5 英文名稱： 二硫鍵氧化還原酶鋅指蛋白5 0.2ml

Anti-PKC alpha 蛋白激酶C αMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

VA(Human Vitamin A) ELISA Kit 人維生素AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-PLK1 (Ser137) 磷酸化絲/蘇氨酸蛋白激酶Plk1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HER3/ErbB3 HER3受體 規(guī)格 0.2ml

ACA-IgM(Mouse anti-cardiolipin antibody IgM) ELISA Kit 小鼠抗心磷脂IgM 96T

PPP2R2B/PP2A-B55 英文名稱： 蛋白質(zhì)磷酸酶2A-B55 0.2ml