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標(biāo)準(zhǔn)操作步驟：

產(chǎn)品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預(yù)熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團(tuán)都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。

5.加入350μl氯仿，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團(tuán)或把組織碎片也一起轉(zhuǎn)移。

7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉(zhuǎn)移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結(jié)合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請(qǐng)分兩次過柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復(fù)到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，轉(zhuǎn)速（>13000×g）離心空結(jié)合柱1min以干燥柱子的基質(zhì)；這一步對(duì)下面的洗脫步驟至關(guān)重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預(yù)熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min；

15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲(chǔ)于-20℃。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因元件E9’終止子染料法qPCR試劑盒供應(yīng)商

貨號(hào)：LZR86037

產(chǎn)品規(guī)格：50次

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點(diǎn)：

產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。

需要注意：

PCR反應(yīng)液請(qǐng)?jiān)诒信渲疲缓笾糜赑CR反應(yīng)儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)。這種冷啟動(dòng)法（Cool Start Method）與熱啟動(dòng)法（Hot Start Method）相結(jié)合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應(yīng)，增強(qiáng)PCR擴(kuò)增的特異性，能得到良好的PCR結(jié)果。

PCR的反應(yīng)條件：

因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。

◇ 循環(huán)次數(shù)

根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。

如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會(huì)出現(xiàn)Smear。

◇ Anneal以及Extension

合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí)，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時(shí)，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時(shí)間太短時(shí)，會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時(shí)間太長時(shí)，會(huì)出現(xiàn)Smear。
使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)陽性對(duì)照和一個(gè)陰性對(duì)照。陽性對(duì)照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對(duì)照作為陽性對(duì)照，陰性對(duì)照是直接用 200μL 水作為陰性對(duì)照。提取結(jié)束后，*得到 200μL 模板 DNA（每個(gè)樣品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則PCR 抑制物很可能會(huì)抑制 PCR。二、PCR（60 μL 體系）

3.樣品管：在 N+2 個(gè)PCR 管中加入下列成分：成分 N 個(gè)樣品管 陰性對(duì)照 陽性對(duì)照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對(duì) 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對(duì)照（純化后） - 18 μL - 陰性對(duì)照（純化后） - - 18 μL電泳檢測(cè)

4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳（本產(chǎn)品不需要單獨(dú)加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果樣品為陽性，將會(huì)得到長度為 3582 bp 的擴(kuò)增產(chǎn)物。

二反應(yīng)的準(zhǔn)備： 　　

待各組份融化后先瞬時(shí)離心，然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系，每次實(shí)驗(yàn)需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽性對(duì)照，測(cè)試反應(yīng)管可以有多個(gè)。配制過程中應(yīng)注意無菌，戴口罩，并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染，推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺(tái)或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。 　　

三、PCR反應(yīng)： 　　

降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃變性2分鐘;首循環(huán)：94℃變性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;八個(gè)循環(huán)開始，每循環(huán)退火溫度下降1℃，其余不變;從第九個(gè)循環(huán)開始，反應(yīng)條件固定為：94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循環(huán)32次;循環(huán)結(jié)束后，在72℃延伸7分鐘，*保持在4℃。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；

◇高靈敏度：檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝；

◇操作簡(jiǎn)便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè)；

◇高通量：多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
咪莫特英文名稱：Itraconazole人內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白酶抑制劑(vaspin)ELISA試劑盒規(guī)格：100mg保存：-20℃，避光

咪唑英文名稱：Imidazole人病毒前S2抗原(HBV preS2Ag)ELISA試劑盒規(guī)格：50mg保存：-20℃，避光

咪唑試劑英文名稱：Imidazole reagent大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA試劑盒 規(guī)格：100克保存：-20℃，避光

咪唑斯汀英文名稱：Mizolastine人卷曲蛋白8(FZD8)ELISA試劑盒規(guī)格：100mg保存：-20℃，避光

迷迭香英文名稱：Rosmarinic acid小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA試劑盒規(guī)格：HPLC≥98% 20mg/支保存：-20℃，避光

米力農(nóng)英文名稱：Milrinone人質(zhì)裂解素(ST2)ELISA試劑盒 規(guī)格：100mg保存：-20℃，避光

米諾地爾英文名稱：Minoxidil人細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒規(guī)格：100mg保存：-20℃，避光

米諾環(huán)素英文名稱：Minocycline大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA試劑盒規(guī)格：100mg保存：-20℃，避光

密蒙花英文名稱：Buddleia大鼠嗜粒細(xì)胞趨蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA試劑盒 規(guī)格：0.5g保存：-20℃，避光

蜜環(huán)菌粉英文名稱：Armillaria powder人抗眼肌抗體(EMAb)ELISA試劑盒規(guī)格：1g保存：-20℃，避光

綿萆薢英文名稱：Dioscorea septemloba Thunb大鼠熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒規(guī)格：2g保存：-20℃，避光

綿大戟英文名稱：Mian Daji大鼠細(xì)胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA試劑盒規(guī)格：0.1g保存：-20℃，避光

綿馬貫眾英文名稱：Dryopteris crassirhizoma人2，3-二磷甘油(2，3-DPG)ELISA試劑盒規(guī)格：1g保存：-20℃，避光

綿馬ABA英文名稱：Filixic acid ABA豚鼠α(TNF-α)ELISA試劑盒規(guī)格：HPLC≥98% 10mg/支保存：-20℃，避光

棉英文名稱：Gossypol人單純病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠAb)ELISA試劑盒規(guī)格：20mg保存：-20℃，避光

Di(propylene glycol) methyl ether, mix...小鼠胃蛋白酶(Pepsin) 進(jìn)口/國產(chǎn)

Diphenyl sulfide,98%大鼠胃蛋白酶(Pepsin) 進(jìn)口/國產(chǎn)

Phenyl propargyl ether,≥90%人血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB) 進(jìn)口/國產(chǎn)

4-Iodoanisole,98%小鼠血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB) 進(jìn)口/國產(chǎn)

4-Iodophenetole,97%大鼠血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB) 進(jìn)口/國產(chǎn)

β-Bromophenetole,98%人胰蛋白酶原激活肽(TAP) 進(jìn)口/國產(chǎn)

4-(Trifluoromethoxy)iodobenzene,97%小鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP) 進(jìn)口/國產(chǎn)

Benzo-15-crown-5,98%大鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP) 進(jìn)口/國產(chǎn)
轉(zhuǎn)基因元件E9’終止子染料法qPCR試劑盒供應(yīng)商Arthrobacter│sp.分離基物: 土樣/生活區(qū)土樣提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 1.生物降解；2.生物催化；3.生物活性物質(zhì)篩選；4.海洋微生物生態(tài)學(xué)研究。培養(yǎng)基: 472生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Candida│guilliermondii提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0013生長條件: 25-28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Streptococcus loxodontisalivarius Saito et al. 2014模式菌株: 未知

Pseudomonas│putda分離基物: 土壤提供形式: 凍干物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 檢測(cè) 培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30-37℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Bacillus│subtilis提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)肌苷酸。培養(yǎng)基: CM0103生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法；定期移植法

Bacillus│thuringiensis提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 能產(chǎn)生殺蟲晶體蛋白和其他殺蟲毒素，用于科研和開發(fā)生物農(nóng)藥。培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法

Aspergillus│flavus提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 定期移植法

蘇云金芽孢桿菌種屬: Bacillus│thuringiensis提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Erysipelothrix│rhuriopathiae分離基物: 豬提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 研究培養(yǎng)基: 396生長條件: 37存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法;